As atividades da Anidrase Carbônica (AC) extra e intracelular foram estudadas na microalga marinha Tetraselmis gracilis (Kylin) Butcher (Chlorophyta, Prasinophyceae) crescendo em cultivos laboratoriais. Durante dez dias de cultivo, determinações diárias do pH, número de células, atividades enzimáticas, carbono inorgânico total dissolvido (CID) e suas principais espécies CO2 e HCO3- foram feitas. A atividade enzimática aumentou na medida em que a população celular em crescimento retirava carbono inorgânico do meio de cultivo. A concentração de dióxido de carbono decresceu rapidamente, especialmente no terceiro dia do cultivo, quando um significante aumento na atividade enzimática intracelular foi observado. A concentração de bicarbonato teve seu maior decréscimo no meio de cultivo no quarto dia, quando a atividade da enzima extracelular teve seu maior aumento, sugerindo seu uso pela alga através da atividade da AC. Após o quarto dia de cultivo, metade das culturas passou a ser aerada com ar atmosférico sem CO2, o que causou um aumento na atividade total e externa da enzima, fazendo com que esses cultivos entrassem na fase estacionária do crescimento antes que aqueles aerados com ar atmosférico normal. O pH do meio foi medido diariamente, aumentando desde o primeiro até o quarto dia e permanecendo quase constante até o fim do cultivo. Material algal transferido para o escuro perdeu toda a atividade enzimática.

The activities of extra and intracellular carbonic anhydrases (CA) were studied in the microalgae Tetraselmis gracilis (Kylin) Butcher (Chlorophyta, Prasinophyceae) growing in laboratory cultivation. During ten days of batch cultivation, daily determinations of pH, cell number, enzymatic activity, and total dissolved inorganic carbon (DIC), as well as its main species, CO2 and HCO3-, were performed. Enzymatic activity increased as the growing cell population depleted inorganic carbon from the medium. Carbon dioxide concentration decreased quickly, especially in the third day of cultivation, when a significant increase of the intracellular enzymatic activity was observed. Bicarbonate concentration had its largest decrease in the cultivation medium in the fourth day, when the activity of the extracellular enzyme had its largest increase, suggesting its use by the alga through CA activity. After the fourth cultivation day, half of the cultures were aerated with CO2-free atmospheric air, which caused an increase in the total and external activity of the enzyme, although, in this condition, the stationary growth phase began earlier than in cultures aerated with atmospheric air. The pH of the media was measured daily, increasing from the first to the fourth day, and remaining almost constant until the end of the cultivation. Algal material transferred to the dark lost all enzymatic activity.

A toxicidade do efluente líquido do "Dutos e Terminais Centro-Oeste São Paulo" (DTCS) terminal marítimo de petróleo da PETROBRAS, em São Sebastião (SP, Brasil), cujo principal componente é a água de produção, foi avaliada através de testes de toxicidade com a diatomácea Skeletonema costatum. Amostras de dois efluentes (A e B), previamente tratados pela PETROBRAS, foram utilizadas nos experimentos. As duas amostras apresentaram alta salinidade (A=67‰; B=62‰) e baixo valor de pH (6,2), enquanto que as suas concentrações de sulfetos, fenóis e hidrocarbonetos de petróleo dissolvidos/dispersos, bem como os seus valores de DBO e DQO, foram bastante distintos. Nos experimentos de toxicidade, os frascos experimentais, em triplicata, para cada tratamento foram expostos à radiação luminosa fluorescente de 266 µm² S-1 e mantidas em um ciclo luz/escuro de 10 h/14 h, a uma temperatura de 24 :t 2ºC. Os valores de CE50 não puderam ser determinados com precisão para o efluente A: após 60 h e 132 h do início dos experimentos esses valores estavam abaixo de 3% e entre 3-6% da concentração de efluente, respectivamente. Foi observado sinergismo entre a toxicidade e a salinidade do efluente sobre o crescimento de S. costatum. O efluente B apresentou uma toxicidade mais elevada: os valores de CEso foram 0,17% e 0,40% da concentração do efluente, após 48 h e 96 h, respectivamente. Estes resultados evidenciaram claramente os efeitos deletérios dos compostos orgânicos residuais contidos no efluente líquido do DTCS, sobre S. costatum. Pode-se concluir que a disposição do efluente nas águas do canal de São Sebastião poderá ser prejudicial à biota local.

The liquid effluent from an oil maritime terminal, with produced water as the main component, had its toxicity evaluated through toxicity tests with the diatom Skeletonema costatum. Two previously treated effluent samples (effluents A and B), were provided by PETROBRAS for the experiments. Both samples presented high salinity (67‰ for effluent A and 62‰ for effluent B) and low pH values (6.2), whereas total sulphide, phenol and nutrient content, dissolved/dispersed petroleum hydrocarbon concentration, BOD and COD values were quite different from each other. During the toxicity experiment, three replicate flasks with samples for each treatment were exposed to a light radiation of 266µE m² S-1 and maintained under a 10 h/14 h lightldark cycle, at a temperature of 24 :t 2ºC. The EC50 values could not be accurately estimated for effluent A: 60 h and 132 h after starting the experiment they were below 3% and between 3-6% effluent concentration, respectively. Synergistic effects between effluent toxicity and salinity on the growth of S. costatum were detected. The effluent B showed higher toxicity: the EC5O values were 0.17% and 0.40% of effluent concentrations, after 48 h and 96 h, respectively. These results evidenced the deleterious effects of residual organic compounds contained in the aqueous effluents from the oil terminal under the present pretreatment on S. costatum. In the light of the present data, the direct disposal ofthese effluents into São Sebastião Channel waters might be very hazardous to its indigenous biota.

Estudou-se o efeito de variações de salinidade sobre as respostas de crescimento e o conteúdo de clorofila-α de quatro espécies de algas planctónicas (Phaeodactylum tricornutum, Tetraselmis gracilis, Minutocellus polymorphus, Chaetoceros sp), usando a técnica de culturas estanques. P. tricornutum, apresentando altos valores de taxas máximas de crescimento (div d-1) em todo o gradiente de salinidade experimental, revelou uma alta capacidade de ajuste metabólico quando submetida a choques osmóticos. T. gracilis, M. polymorphus e Chaetoceros sp foram capazes de deslocar o ótimo de salinidade para a taxa máxima de crescimento, em função da salinidade de pré-cultivo. As quatro espécies estudadas mostraram oscilações da taxa específica de crescimento (div d-1) e do conteúdo de clorofila-α (pg cel-1), relacionadas aos ciclos de claro-escuro.

The effect of salinity changes on the growth responses and chlorophyll-α content of four species of planktonic algae (Phaeodactylum tricornutum, Tetraselmisgracilis, Minutocelluspotymorphus, Chaetoceros sp) was evaluated using a batch culture technique. P. tricornutum, showing high values of maximum growth rate (div d-1) over the entire salinity range, revealed a great capability of metabolic adjustment when subjected to osmotic shocks. T. gracilis, M. polymorphus and Chaetoceros sp were able to displace the salinity optimum related to the maximum growth rate, depending on the preconditioning salinity. The four studied species showed oscillations of specific growth rate (div d-1) and chorophyll-α content (pg cell-1) related to light-dark cycles.

A atividade de nitrato redutase (NR) foi estudada na diatomácea marinha Biddulphia longicmris. A NR é a enzima responsável pelo processo de assimilação de nitrato. O nitrato é reduzido no interior da célula a nitrito pela ação da NR. Esta enzima é normalmente oligomérica e utiliza o NADH como substrato doador de elétrons. Em alguns organismos também são encontradas NRs capazes de utilizarem o NADPH como doador eletrônico para a redução do nitrato a nitrito. Para a diatomácea B. longicmris foram apresentadas evidências de que a sua NR é específica para NADH e que a redução de nitrato em presença de NADPH não acontece. Determinações in vitro dos valores das constantes de Michaelis-Menten (KM) usando nitrato e NADH como substratos, são respectivamente 50µ e 80µM. A temperatura ótima de reação enzimática e a sua dependência ao pH também foram estudadas. Cultivos de B. longicmris foram acompanhados por períodos de 24 horas e foi mostrado que a atividade de NR é encontrada em maiores níveis durante os períodos de transição de luz/escuro. Os anions nitrito, produtos da redução de nitrato, são eliminados pelas células nos períodos de maior atividade de NR e se acumulam no meio de cultura. Células submetidas à ausência de nitrato apresentam uma repressão da expressão de NR, sendo ativadas quando pulsos de nitrato são fornecidos a estas culturas.

Nitrate reductase (NR) activity was studied in the marine diatom Biddulphia longicmris. During 24 hours of sampling, NR activity was found during day time and in the transition day-night. Nitrite anions, the product of nitrate reduction, was released by the cells at the times NR was active, and accumulated in the culture medium. Whenever the cultures of B. longicmris were submitted to nitrogen deprivation, NR activity could not be detected. In vitro determination of KM values for NR using nitrate or NADH were respectively 50//M and 80 /*M. Temperature and pH dependence of NR activity were also determined for this organism.

Estudou-se o efeito de variações de salinidade (0-40 %o) e temperatura (11-36ºC, em intervalos de 5ºC) sobre a taxa máxima de crescimento (div d-1), o rendimento máximo (logio nº cel ml"¹) e o conteúdo de clorofíla-a (pg cel-1) de quatro espécies de algas planctónicas, sob condições de laboratório. Phaeodactylum tricornutum cresceu em toda a amplitude de salinidade experimental e entre 11-26ºC. As mais altas taxas de crescimento (1.6 div d-1) foram obtidas entre 9-30 %o e 16-26ºC. O ótimo de salinidade para o rendimento máximo (7.0) foi observado entre 9- 35%o, à 16ºC. Tetraselmis gracilis se reproduziu nas salinidades de 4 a 40 o e nas temperaturas de 11 a 31ºC, com os mais altos valores de taxas máximas de crescimento (1.6 div d-1) e rendimento máximo (6.1), ocorrendo entre 14-40 %o, nas temperaturas entre 11-21ºC e 11-16ºC, respectivamente. Minutocellus polymorphic e Chaetoceros sp cresceram entre 9-40 %o e 11-31 ºC. Os valores mais altos para as taxas máximas de crescimento (2.1 e 2.6 div d-1, respectivamente) foram obtidos à 31 ºC, entre 20-35 %o e 20-40%o, respectivamente. Os máximos rendimentos para M polymorphic (7.2) foram observados entre 16-21 ºC e 20-40%o< e para Chaetoceros sp (6.8), entre 25-40 %o e 16-31 ºC. Nas quatro espécies estudadas, o conteúdo de clorofíla-a por célula não se associou claramente às variações de temperatura e salinidade. Nos extremos baixos de salinidade, em que a divisão celular foi inibida, verificou-se um aumento da concentração celular de clorofila-a.

The effect of salinity (0-40 %o) and temperature (11-36ºC, at 5ºC intervals) variations on maximum growth rate (div d-1), maximum yield (logio cell number) and chlorophyll-α content (pg cell-1) of four planktonic algae was examined under laboratory conditions. Phaeodactylum tricornutum grew over the entire range of experimental salinities, at 11-26 ºC. The highest maximum growth rates ( 1.6 div d-1) occurred between 9-30 %o and 16-26 ºC. Optimum salinity range for maximum yield (7.0) was found at 9-35 %c, under 16 ºC. Tetraselmis gracilis reproduced from 4 to 40 %o at 11-31 ºC, with the highest values of maximum growth rate ( 1.6 div d-1) and maximum yield (6.1) occurring at salinities between 14-40 %o at 11-21 ºC and 11-16 ºC, respectively. Minutocellus polymorphic and Chaetoceros sp grew between 9-40 %o and 11-31 ºC. Their highest maximum growth rates (2.1 and 2.6 div d-1, respectively) were found at 31ºC, between 20-35 %o and 20-40 %o, respectively. The highest maximum yields for AT. polymorphic (7.2) were recorded between 16-21 ºC at 20-40 %o and for Chaetoceros sp (6.8), between 25-40 %o at 16-31ºC. Chlorophyll-a content per cell was not conspicuously associated to temperature and salinity for the four species. At low salinity extremes, when cell division was inhibited, an increase in the amount of chlorophyll-a per cell was detected.

P. tricornutum was grown in batch cultures under 21ºC temperature and continuous irradiance of 183 µE.m-2 . s-1, provided by fluorescent light tubes. Cultures growth were followed by cell countings, "in vivo" fluorescence and cellular protein, carbohydrate and chlorophyll-α content. The maximum value of protein/carbohydrate ratio was found at the exponential phase and the minimum value at the stationary phase. This ratio characterizes the physiological stage of the culture. Cell uptake rates for nitrate, ammonium and phosphate from the media were higher during the lag-phase. Nitrite excretion by the cells were detected following nitrate uptake.